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CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒相关操作说明
点击次数:376 发布时间:2018-08-28
   CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒相关操作说明
  一、制作标准曲线
  1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
  2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
  3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。
  二、细胞活性检测
  1.在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔)。将培养板放在培养箱中预培养。
  2.向每孔加入110ul的CCK溶液。
  3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
  4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
  5.如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1%w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
  三、细胞增值-毒性检测
  1.在96孔板中配置100ul的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时。
  2.向培养板加入10ul不同浓度的待测物质。
  3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间。
  4.想每孔加入10ul CCK溶液。
  5.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
  6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
  7.如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1%w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
  注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基,去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
  活力计算:
  细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100;
  A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度;
  A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度;
  A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度;
  细胞活力*:细胞增殖活力或细胞毒性活力。

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