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4*dNTPs厂家分析DNA的测序技术
点击次数:157 发布时间:2018-10-19
   4*dNTPs厂家分析DNA的测序技术
  DNA测序是指确定DNA双股链上每一个独立结构单元或碱基的确切顺序的过程。测序经常被称为破译,因为其结果就像解码一样。解码结果包含数百页和成千上万种字母的序列,这些字母表示4种不同的碱基,它们是腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶,分别用它们的首字母A,T,C,G表示,其排列顺序中蕴藏着各种各样的遗传信息和生命指令。
  在分子生物学研究中,DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和Gilbert发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生A,T,C,G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DNA序列。目前Sanger测序法得到了广泛的应用。
  Sanger法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(4*dNTPs),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTP和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

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